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應用豬6酮前列腺素酶聯免疫說明書
瀏覽次數:941發布日期:2015-03-31

                  豬6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)酶聯免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:                                                          96T
2ng/mL -80ng/mL

使用目的:
本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)水平。用純化的豬6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a),再與HRP標記的6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)濃度。 
試劑盒組成 
1    30倍濃縮洗滌液    20ml×1瓶    7    終止液    6ml×1瓶
2    酶標試劑    6ml×1瓶    8    標準品(160ng/mL)    0.5ml×1瓶
3    酶標包被板    12孔×8條    9    標準品稀釋液    1.5ml×1瓶
4    樣品稀釋液    6ml×1瓶    10    說明書    1份
5    顯色劑A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2張  
6    顯色劑B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1個
標本要求 
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80ng/mL    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
40ng/mL    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
20ng/mL    3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
10ng/mL    2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
5ng/mL    1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液


2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結:


計算
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

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