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教你正確操作小鼠免疫球蛋白試劑盒
瀏覽次數:364發布日期:2021-03-29

這個問題由上海紀寧來幫您解決.一直以來,我司小鼠免疫球蛋白試劑盒以其敏感性高、特異性強、重復性好的優點,在科研中深受廣大,科研工作者的喜愛。

小鼠免疫球蛋白試劑盒檢測原理:
小鼠免疫球蛋白試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗。往預先包被對稱性免疫球蛋白抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的對稱性免疫球蛋白試劑盒呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

小鼠免疫球蛋白試劑盒樣品收集、處理及保存方法:
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
3、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘。
4、取上清液保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。
注:標本溶血會影響檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

小鼠免疫球蛋白試劑盒操作:
小鼠免疫球蛋白試劑盒使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。


標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。在450nm波長處測定各孔的OD值。局限6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到精確的結果。

小鼠免疫球蛋白試劑盒:
1、靈敏度:最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為1.0 nmol/L。
2、特異性:不與其它細胞因子反應。
3、重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

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